Embora a Higienização Simples das Mãos (HSM) seja um procedimento simples, ainda requer mudança de hábito, e existem discrepâncias entre conhecimento da HSM e sua prática¹. Percebe-se que existe lacuna entre o reconhecer a necessidade de uma prática e sua adesão, pois, embora os alunos conheçam a técnica e a importância das mãos como veículo de contaminação cruzada, a adesão é baixa¹. O conhecimento denota uma série de informações incorporadas e organizada pelo indivíduo, trata-se da dimensão do saber. O conceito de habilidade está associado ao saber fazer, à capacidade de fazer uso produtivo do conhecimento adquirido com vistas à consecução de um HSM. A prática da simulação pode ser utilizada tanto como atividade de ensino-aprendizagem, como oportunidade de avaliar e medir sua integração às múltiplas competências profissionais.² Objetivou-se comparar os conhecimentos e as habilidades dos acadêmicos do 5º e do 9º período de Enfermagem da Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN) quanto aos procedimentos de higienização simples das mãos (HSM). Estudo descritivo realizado com 58 acadêmicos de enfermagem do 5° e 9° períodos da Universidade Federal do Rio Grande do Norte, com aplicação de um questionários sobre o conhecimento e uma lista de verificação das habilidades. Obteve parecer favorável do Comitê de Ética do HUOL (CAAE 0002.0.294.000-10). Dos 58 acadêmicos observados, 31 (83,8%) do 5º e 27 (77,1%) do 9º período. A análise mostra que em ambos os períodos, a média da porcentagem de acerco da habilidade no procedimento de HSM sobressai quando comparado com a média do conhecimento no mesmo procedimento. Expondo a média do percentil, temos que 73,1 (DP = 10,2) relacionado ao conhecimento do 5º período e 71,3 (DP= 15,4) da média de porcentagem do conhecimento do9º período, já, as médias de porcentagens das habilidade correspondem a 81,1(DP = 13,9) e 83,6 (DP= 14,0), respectivamente. Percebeu-se também que o 5º (p-valor = 0,016), e 9º períodos (p-valor = 0,005) obtiveram divergências significativas entre conhecimento e habilidade. Observou-se que os acadêmicos detêm melhor habilidade ao comparar com o conhecimento, no procedimento de higienização simples das mãos, bem como, podemos observar que as médias estão semelhantes mesmo sendo uma análise dos concluintes da disciplina de Semiologia e Semiotécnica, com os alunos em final do curso, prontos para atuação profissional.